O QUE DEVE SER FEITO NESTA ATIVIDADE?
Considerando essas informações, imagine que você irá realizar a análise da amostra de DNA de um paciente com suspeita de hemocromatose. Para saber se o gene HFE está presente nessa amostra, você pode utilizar uma sonda que tem a mesma sequência de parte do gene de interesse e um marcador, como um isótopo radioativo, que permite que a sonda seja detectada.
Para isso, em laboratório, seriam realizadas as seguintes etapas:
1) Extração de DNA da amostra do paciente;
1) Reação em cadeia da polimerase de DNA (PCR convencional), para amplificação da região de interesse;
2) Digestão enzimática da amostra de DNA amplificada, com enzima de restrição;
3) Eletroforese em gel de agarose para verificação dos fragmentos digeridos;
4) Hibridização da sonda e Southern blot.
Ao adicionar a sonda à amostra, é possível observar se ela hibridizará com alguma região do DNA. Se a sonda é hibridizada, ela aderirá ao DNA da amostra, mas, se não, ela pode ser facilmente removida por lavagem.
Após enxaguar a sua amostra, você expõe o material a um filme fotográfico para determinar se a sonda aderiu ao DNA e, quando examinar o filme, você saberá se houve hibridização ou não, ou seja, se a sequência de DNA da sonda está presente também em sua amostra.
Na planilha de atividades A, você tem uma sequência de DNA de 380 pares de bases (pb) que representa sua amostra. Toda décima base está em negrito, e a base no começo de cada fita está numerada. Você também tem uma sequência pequena que corresponde a uma sonda para o gene da hemocromatose (HFE).
*Você usará a sonda para determinar se o gene HFE está presente em sua amostra.
